BACTERIOLOGICO DE CUALQUIER SECRECION (C. DE GRAM)

Información detallada
Código de Examen 
Recipiente   M20
Sinónimos   Coloración de Gram
Volumen Normal   
Volumen Pediátrico   
Recolección   Cualquier sitio o líquido.
Días de proceso   Lunes a Domingo
Tiempo de Análisis   

1 hora en muestras urgentes. Diario para pacientes ambulatorios.
Almacenamiento   Temperatura ambiente: 7 días; refrigerada: 7 días
Contraindicaciones   No se aceptan muestras congeladas.
Utilidad   

La coloración de Gram es una coloración diferencial utilizada para demostrar las propiedades de coloración de todos los tipos de bacterias. Las bacterias Gram positivas fijan el cristal violeta y luego de la decoloración aparecen de color azul. Las bacterias gram negativas no son capaces de fijar el cristal violeta y después de la decoloración son contrastadas por el colorante rojo de safranina. La coloración de Gram confirma la presencia de bacterias y su morfología. En meningitis y otros cuadros clínicos, el Gram confirma el recuento celular. Junto con el cultivo, éste tiene prioridad sobre las técnicas de látex.
Limitaciones   

Una coloración de Gram negativa, sinembargo, no excluye la posibilidad de etiología bacteriana o micótica. Las características de la coloración de Gram pueden ser atípicas cuando son realizadas a partir de cultivos jóvenes, viejos, muertos o degenerados.
Método   

*Realice un frotis delgado del material en estudio en una placa nueva y deje secar al aire. *Fije el material, pasando la placa 3 veces por la llama del mechero *Coloque el frotis en la gradilla de coloración y cubra la superficie con colorante Cristal Violeta. *Después de 1 minuto enjuague con agua destilada. *Cubra la placa con Lugol por 1 minuto y enjuague de nuevo con agua *Agregue unas pocas gotas de de alcohol-acetona y deje 10 segundos. *Enjuague con abundante agua y cubra la placa con colorante de safranina por 1 minuto y enjuague de nuevo. *Coloque la placa en una gradilla en posición vertical para que el exceso de agua drene hasta que se seque. *Examine al microscopio en 100X con aceite de inmersión.
Rango de referencia   Depende del sitio de la muestra
Información Técnica   

En las muestras de esputo una baja proporción de células escamosas es más importante que el hallazgo de la coloración en el gram. Una alta proporción de células epiteliales escamosas sugiere orígen oral, y la muestra deberá ser rechazada, pués los resultados pueden ser no significativos o erróneos. La mayoría de los laboratorios chequean la muestra en el microscopio con objetivo de bajo poder para determinar la calidad de la misma. Más de 25 células epiteliales escamosas por campo en bajo poder se considera contaminación. En las muestra de LCR, el hallazgo de células bacterianas típicas como por ejemplo S.pneumoniae, H.influenzae o N.meningitidis, o levaduras, tales como C.neoformans, pueden ser utilizadas como evidencia presuntiva del agente etiológico de meningitis. En las muestras de orina, la presencia de 2 o más organismos por campo en un extendido de orina no centrifugada observada con aceite de inmersión, generalmente indica un recuento de colonias de más de 100.000 UFC/ml. La presencia de más de un leucocito por campo de inmersión se correlaciona con piuria. En muestras de materia fecal indican infección debida más bacterias invasivas que toxigénicas. Los leucocitos están generalmente presentes en infecciones causadas por Salmonella, Shigella,, Campylobacter y Yersinia; y generalmente son ausentes en infecciones por E.coli toxigénica, V.cholerae y C.difficile.
Preparación   

La muestra y/o la placa marcada se debe transportar a 20-25oC. El laboratorio debe ser notificado sobre el orígen de la muestra.
Información adicional   

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