HEPATITIS C, CARGA VIRAL

Información detallada
Código de Examen 
Recipiente   M02
Sinónimos   Amplificación de DNA; PCR
Volumen Normal   2 ml
Volumen Pediátrico   1 ml
Recolección   Plasma
Días de proceso   Lunes a Viernes
Tiempo de Análisis   20 días
Almacenamiento   Congelado
Contraindicaciones   
Utilidad   
Limitaciones   

Esta prueba debe ser cuidadosamente monitoreada con controles apropiados, especialmente controles negativos, debido a la gran sensibilidad de las técnicas de amplificación.
Método   

Las tecnicas de PCR (Reacción en Cadena Polimerasa) requieren del conocimiento en la secuencia de los genes de interés para ser amplificados. De los datos de la secuencia, las sondas de 25 nucleotidos pueden ser construídas utilizando sintetizadores oligonucleótidos. Estas sondas tienen una secuencia de 100-2000 bases del gen de interés. Las sondas son conformados por la unión de las sondas a las hebras opuestas de la doble hélice. Una DNA polimerasa especial purificada a partir del Thermus aquaticus (Taq) es utilizada porque es capaz de resistir varias desnaturalizaciones, realineamientos y ciclos de polimerización. La reacción requiere del DNA blanco, de las sondas, de la polimerasa Taq y de 4 trifosfatos deoxinucleotidos. La mezcla es calentada varios minutos a 95oC para separar la doble cadena de DNA. Las sondas son luego unidas al DNA blanco entre 50oC y 60oC seguida de una reacción polimerasa procesada por varios minutos a 72oC. Este ciclo de desnaturalización, alineación y polimerización es repetido durante 25-35 minutos amplificando la secuencia entre las sondas por miles y millones de veces. El DNA amplificado pueden luego ser detectados por electroforesis en agarosa y coloreados. Las bandas amplificadas pueden ser observadas con luz UV.
Rango de referencia   
Información Técnica   

En la actualidad el procedimiento ha sido programado para que el calentamiento y los ciclos de la reacción sean automaticos. La tecnica tiene una sensibilidad no precedente, siendo disponible el uso de nanogramos para cuantificar el DNA blanco y podría teoricamente se utilizado para amplificar el DNA de una sola célula.
Preparación   Separar el plasma los glóbulos rojos
Información adicional   

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