LINFOCITOS CD4 LINFOC. T AYUDA MONO (CIT. DE FLUJO

Información detallada
Código de Examen 
Recipiente   M02
Sinónimos   Clasificación Celular por Fluorescencia Activada - Inmunotipificación
Volumen Normal   3 cc
Volumen Pediátrico   0,5 cc
Recolección   

Sangre total, aspirado de medula ósea, tejidos frescos, tejidos congelados.
Días de proceso   Lunes a Viernes
Tiempo de Análisis   Al día siguiente
Almacenamiento   La muestras de sangre son estables de 20-25oC por 30 horas.
Contraindicaciones   

Muestras de sangre coaguladas, refrigeradas o congeladas. Muestras con más de 30 horas de haber sido recolectadas.
Utilidad   

La citometría de flujo es importante en la inmunofenotipificación y en la información del ciclo de DNA, de interés diagnóstico y pronóstico en hematopatología, citopatología y en patologia quirúrgica general.
Limitaciones   

La citometría de flujo es de uso limitado cuando es para diagnóstico diferencial de los neoplasmas no linfoides y no hematopoyéticos. La naturaleza del tejido puede también conferir severas limitaciones. Generalmente las biopsias endoscópicas son también demasiado pequeñas para extraer suficientes células para un diagnóstico significativo. Sinembargo la sangre, medula ósea y otros fluídos corporales son convenientes para los estudios de citometría de flujo. Tejidos fibróticos o escleróticos como la piel, son frecuentemente difíciles de disociar. La extracción de células suficientemente viables para la evaluación es difícil. Además, tejidos necróticos producen resultados pobres.
Método   

Se realiza una suspensión de las células y se marcan con anticuerpos conjugados con flurocromo, se lavan y se analizan en el citómetro de flujo láser. Se utilizan paneles de anticuerpos para cuantificar el número de células B, células T y células mielomonociticas. La clonación de las células-B es evaluada con las cadenas livianans de inmunoglobulinas mientras que la clonación de las células-T es interferida por la expresión anormal de los antígenos de las células-T.
Rango de referencia   
Información Técnica   

La citometría de flujo provee datos de inmunofenotipificación y/o ciclos de DNA, dependiendo de la información deseada y de la metodología. Los estudios de inmunotipificación son más utilizados para la evaluación de tejidos hematológicos o linfoides. Además junto con los datos de la inmunotipificación, se obtiene información en relación al tamaño de la célula (por la luz emitida) y la complejidad interna (90 grados de luz emitida). Por la selección independiente de las poblaciones celulares para la evaluación, los resultados de inmunotipificación sobre las respectivas poblaciones pueden ser extraídos sin procedimientos adicionales. Por ejemplo un nódulo linfoide contiene poblaciones de células linfoides grandes y pequeñas, puede presentar una población reactiva de pequeñas células-T y una población monoclonal de células-B grandes. La citometría de flujo no es favorable para la evaluación de neoplasmas no hematopoyéticos, sinembargo la carencia de expresión del CD-45 (antígeno leucocitario más común) sobre una población debe ser tenida en cuenta como sospecha de otro proceso. Aproximadamente el 80% de los linfomas no Hodgkin son derivados de las células-B monoclonales. Característicamente los linfomas de células-T podrian expresar menos de una variedad de antígenos de células-B y expresar inmunoglobulinas de cadenas livianas kappa o lambda, pero aproximadamente el 5% al 10% de los linfomas son negativos en su superficie para inmunoglobulinas. La presencia de una población negativa de inmunoglobulinas en las células-B es también una demostración sustancial de clonación. La carencia de expresión de los antígenos de células-B normales o la adquisición de la expresión de antígenos de células-T, representa fenotipo aberrante y menor criterio satisfactorio para malignidad. Los linfomas de células-B, los cuales coexpresan antígeno CD5 de células-T se caracterizan por ser linfomas de linfocitos pequeños y de variedades de linfocitos diferenciación intermedia. La expresión de CD10 es caracteristica de linfoma folicular . Los linfomas de células-B carecen de expresión del HLA-Dr representan un grupo de pobre pronóstico. Aproximadamente el 20% de los linfomas no Hodgkin son derivados de las células-T, para éstos neoplasmas, la demostración de la clonación es más desafiante. La clonación puede ser inferida por la documentación anormal de la expresión de los antígenos de las células-T Pan , de la subsecuente expresión anormal de células-T o de la expresión de antígenos timocíticos. Para un infiltración atípica de células-T en la cual la citometría de flujo no prueba clonación, el uso de estudios de restructuración genética puede ser invaluable. Los estudios de citometría de flujo en los casos de enfermedad de Hodgkin no son generalemente diagnóstico. Tipicamente, la mayoría de las células son linfocitos-T maduros reactivos con un número variable de células-B policlonales. Este patrón no es distinguido de todas las hiperplasias reactivas benignas. La inmunotipificación para enfermedad de Hodgkin es mejor realizada en un corte con parafina utilizando un panel de anticuerpos apropiado que se correlacione con las características morfológicas de las células neoplásicas. Cuando se considera la posibilidad de un neoplasma por precursores granulociticos/monociticos se demuestra por la expresión de CD13, CD14 o CD33. Además la expresión de CD45 es característicamente más débil que aquella observada tipicamente en los neoplasmas linfoides. La pérdida de reactividad para otros marcadores de linaje de células T o B es también probable.
Preparación   

Los tejidos frescos se colocan en una caja de petri, o en un tubo de ensayo o frasco con solución salina. Estos tejidos deben ser transportados refrigerados con hielo.
Información adicional   

El siguiente panel de marcadores linfocitarios es el más comunmente utilizado para la evaluación de linfomas y leucemias, donde CD es igual a cluster-designation: 1. Antígenos asociados a Células-T: CD1, CD2, CD3, CD4, CD5, CD7,CD8, receptores de células-T (TCR) alfa- beta, TCR gama-delta, citoplasmático CD3. 2.Antígenos asociados a Células-B: CD10 (CALLA), CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD79b, CD103, Ig. total, Kappa, Lambda, Ig.G, Ig.M, Ig.D, Ig.A, FMC-7, Kappa Citoplasmática, Lambda Citoplasmática. 3. Antígenos Mielodes/Monociticos: CD11b, CD13, CD14 (Mo2), CD14 (MY4), CD15, CD33, CD117(C-kit), Mieloperoxidasa. 4.Antígenos Miceléneos: CD9, CD11c, CD16, CD25, CD30, CD34, CD38, CD41, CD42b, CD45, CD56, CD57, CD61, HLD-Dr, TdT, Glicoforina.

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